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 新手發文好害羞，以後沒事會上來吵大家，請多多指教唷唷唷>///<

因為拿到了蝕友的種子，打算組培出來後分享，因此開了這個主題，希望有經驗的朋友指點一二，做得不好請不用客氣指出來，這樣才有成長的空間^^

以下開始日記式的文章（我也只會寫這種文 囧"）

--------------------------------------------------------------------------

最近要弄毛種子的無菌播種，我們實驗室有3年以上沒有人弄組培了吧，東西缺超大ˊˋ...

前幾天特別去徵得老師同意，開始一樣一樣湊齊材料，要來弄組培囉！

不過剛開始就大受打擊...

為甚麼我們系上的MS培養基要自己配啊啊啊啊~~~~~~！！

我一直以為這邊也有一整罐配好的MS粉，加個水煮一煮就是健康好吃的MS培養基

結果

要自己把所有化合物加在一起，變成一鍋（？）培養基啊啊啊啊~~~~！！

MS是很麻煩的培養基耶...，http://www.labflytrap.com/in-vitro-aj.html往下拉可以看到M&S medium的配方，不只如此，這些化合物不能全部放同一個容器，必須考慮彼此之間的化學反應...，為了避免沉澱，母液會分成很多罐冰，要用時再合體。以今天去問花卉組來說，他們那邊的母液是先配成很多瓶，再合併成6瓶，然後要用的時候從這6瓶各取一定量配成1L的培養基...

好懷念以前大學那一小小罐白色的MS粉末，早知道就A一些來冰啦...Q口Q|||









發表文章時間2010/04/19 11:09pm　IP: 已設定保密[本文共 1190 位元組]　 
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 培養基配置

結果是跟隔壁助理學長要到1L的量\(@▽@)/|||

這邊是用四罐配成一罐，每罐取10X或100X

因為毛種子用1/2 MS即可，所以配1公升其實就是2公升，超開心的啦><

配方：1/2 MS + 3% sucrose+1% agar
PH：5.5~5.8

↓MS培養基母液、60g的蔗糖
　

↓培養基分裝、加入1% agar（右圖瓶底有粉末...）
 

↓用鋁箔紙封口（哭），拿去滅菌




↓滅完菌的瓶子們放著，還有圖中的鋁箔紙很失敗，後來發現不用這麼大片，太大片反而封不緊，後來播種完改成小片的封口，果然又穩又密~！（看得出我是新手...）
　







發表文章時間2010/04/19 11:10pm　IP: 已設定保密[本文共 1497 位元組]　 
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 [這篇文章最後由biosaa在 2010/04/19 11:20pm 第 1 次編輯]
2010.03.27 消毒+無菌播種

種　　類：亞熱帶毛氈苔
消　　毒：6%漂白水消毒10分鐘
特殊處理：無

本來想採用YAB同鞋提供的滴管消毒法，結果我們兩間實驗室竟然都找不到玻璃滴管，只好採用濾紙過濾的方式來消毒ˊˋ"

先放在微離心管中加漂白水搖晃10分鐘，然後倒到滅過菌的濾紙上，用滅菌水清洗，再用pipette吸取滴入瓶內。

↓濾紙和漏斗放在一起，用鋁箔紙封住拿去滅菌
　

↓眾器材一覽


↓拿去滅菌的器材們，如tips、水、大鑷子、擦手紙、改成較小塊的封口用鋁箔紙等。其中大鑷子以鋁箔紙包覆、擦手紙和鋁箔紙放入燒杯後也用鋁箔紙封住燒杯口滅菌。


↓這部分不能滅菌，只能以酒精噴過放入無菌操作台


↓無菌操作台。第一次使用沒有玻璃門的操作台，風向是水平的唷！
　

（操作過程很難拍...，大概就是跟開頭敘述的差不多！）

↓完成，注意封口改成小片的鋁箔紙囉！真的比較緊密，不會轉動下方也不會露出空隙！




---------------------------------------------------------------------------------

後記：

1.瓶子打開鋁箔紙前都會先用火燒過封口處，傾斜晃動的過程中有些培養基就崩掉了，變成到處滑的果凍...............................

2.操作時一定要記得關上紫外線燈，我在過程中有幾次忘記關，回家也沒有甚麼異狀，結果晚上睡覺的時候眼睛竟然痛醒，一整晚都睡不好，臉部也有刺痛感。後來想想紫外燈開著其實就像是直視太陽在操作，對身體的傷害很大啊...！！到今天起床眼睛還是很乾澀不適，偏偏眼科都沒有開，大家一定要注意實驗安全啊ˊˋ







發表文章時間2010/04/19 11:12pm　IP: 已設定保密[本文共 2547 位元組]　 
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 播種過了幾天後我就後悔用漏斗過濾了...

2010.04.04

漏斗過濾完得用鑷子把種子從濾紙上抹/沖/撥進瓶子裡，我又是第一次用，過程中很容易出狀況

所謂的狀況就是發霉.........



怎麼辦咧~？

種子那麼貴不能丟，只好全部倒出重來啊...

先用水把裡面的東西沖出來，本來希望只有種子被沖出，結果水一下去，整個培養基就變成寒天茶，只好種子+培養基全部倒出來

倒出來也沒辦法用濾紙或者紗布分離，因為種子實在太小啦！只能用pipeet慢慢吸，把果凍吸掉留下種子，從250ml燒杯濃縮到一個微離心管，花了快要30分鐘...

裝進微離心管後，加入6%漂白水，再從頭消毒→洗清→播種

這次總算沒有發霉了ˊˋ|||

以後不用濾紙了啦！還是照大學時代消毒清洗都在微離心管最方便，種子洗完直接吸進tip然後噴進瓶子就好了，原來這才是最方便的方法！！

如果有其它的消毒秘方請一定要告訴我唷！YAB兄的方法因為沒有玻璃滴管所以沒試過，也是有點可惜@@a







發表文章時間2010/04/19 11:12pm　IP: 已設定保密[本文共 922 位元組]　 
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 [這篇文章最後由biosaa在 2010/04/19 11:21pm 第 1 次編輯]
2010.04.05

種　　類：這一批有三款不會休眠的長柄毛，種子也不需要冷積層處理唷！
消　　毒：6%漂白水消毒10分鐘
特殊處理：無

　

2010.04.09

03.27播的D. admirabilis發芽了！才過了13天唷！

當初用鑷子播種子效果很差，一堆種子被鑷子塞進培養基裡面，變成下圖的窘境，我也愛莫能助啊...ˊˋ



這是D. coccicaulis，埋得更深（哭）




不好意思洗了好多篇 囧|||







發表文章時間2010/04/19 11:13pm　IP: 已設定保密[本文共 993 位元組]　 
gotohsu 




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 加油了~
剩下的就等您的消息了~







發表文章時間2010/04/19 11:27pm　IP: 已設定保密[本文共 32 位元組]　 
csyin 
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 saa會害羞?
少來了~   ˋ( ° ▽° ) ノ

就我的經驗, 用濾紙搭配玻璃滴管超快速.
用pipette來播是不正確的, 因為pipette很難滅菌.
另外, 用那麼大瓶來播種也不對,
因為瓶子越大越易污染,
種子播得越多越易污染.
我以前播種是用直徑約2.5到3cm的平底玻璃管來播的.
每管只播10粒而已.
做得好的話污染率降到10%以下.
也就是說做10管大概只有1管污染.







發表文章時間2010/04/19 11:31pm　IP: 已設定保密[本文共 361 位元組]　 
cool7114 

 

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 每次看到組陪就覺得很神奇.....

不知道器官能不能組陪........







發表文章時間2010/04/19 11:31pm　IP: 已設定保密[本文共 60 位元組]　 
csyin 
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 妳配培養基有個重大的錯誤, 所以導致果凍不均勻...







發表文章時間2010/04/19 11:34pm　IP: 已設定保密[本文共 47 位元組]　 
tata0421 

 

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 [這篇文章最後由tata0421在 2010/04/19 11:55pm 第 1 次編輯]
扁平蓮座的可以用petri dish
很方便







發表文章時間2010/04/19 11:38pm　IP: 已設定保密[本文共 101 位元組]　 
biosaa 




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 [這篇文章最後由biosaa在 2010/04/19 11:43pm 第 1 次編輯]
我是新人當然會害羞囉=3=

教主別賣關子了快告訴我啊！！是agar沒有搖勻嗎？

請順便教一下濾紙搭配玻璃滴管怎麼用，教主大好帥QQ

不過話說我用pipette播之後都沒有汙染唷~，成功率百分百！可見我有使用pipette的才~！至於瓶子是不小心的啦，後來想到已經太遲了，超小的種子和大到爆炸的瓶，我也很囧||||

巨爪兄，植體也可以，我就是打算等種子長成之後直接切來組培，這樣就不用消毒了=ˇ=







發表文章時間2010/04/19 11:40pm　IP: 已設定保密[本文共 430 位元組]　 
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 叫我爺爺就教妳!
(°ω°)+







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 人客啦~快來看 有美女要找爺爺了







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愛花ㄉ青蛙 
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 [這篇文章最後由愛花ㄉ青蛙在 2010/04/20 00:05am 第 3 次編輯]
果凍調好洋菜溶解好之後　要邊喇邊倒進瓶子裡
果凍粉　水晶果凍粉五百西西加一克就可以了
五百西西的果凍可以分裝六到七瓶左右的瓶子
果凍高度有一公分以上

鋁鉑紙　使用鋁鉑紙捲寬度分成三或四份的大小就可以了　大概五公分吧

濾紙滅菌
把濾紙丟進瓶子裡　比照果凍滅菌方法

無菌水套種子就可以播的算均勻了
不然就是找根棉花棒之類的　黏附種子　然後徒在果凍上面

種子滅菌可以用濾紙包起來　全部丟到滅菌的溶液裡

果動太薄　在斜晃瓶子的時候會造成果凍脫離








發表文章時間2010/04/20 00:00am　IP: 已設定保密[本文共 522 位元組]　 
張喏 

 

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 SAA
現在隔壁幾乎>

CP LOVE的未來
和您我的心血
找天周末
再討論八
我有想過要在塔內做
可是
這裡有固定的運作
可能有困難








發表文章時間2010/04/20 00:04am　IP: 已設定保密[本文共 154 位元組]　 

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